異丙基-β-D-硫代半乳糖苷 IPTG北京索萊寶科技有限公司

金牌供應商

性能參數

產品名稱: 異丙基-β-D-硫代半乳糖苷 IPTG
英文名稱:  IPTG(Isopropyl β-D- Thiogalactopyranoside )
產品貨號: I8070
產品規格: 5g
產品產地: 北京市通州區馬駒橋聯東U谷85A三
產品商標: Solarbio
價    格: 180元
保存與運輸: 2-8℃
現貨狀態: 現貨
產品資料: 實驗方法技術資料
更新時間: 2019/10/10 16:19:00
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使用范圍:僅限科研使用,不能應用于臨床
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北京索萊寶科技有限公司
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產品詳細描述




異丙基-β-D-硫代半乳糖苷 IPTG

品牌:Solarbio | 貨號:I8070
商品貨號:商品品牌:規格基本售價:選擇規格
I8070-1gSolarbio1g60.00元
I8070-5gSolarbio5g180.00元
I8070-100gSolarbio100g3000.00元


有效期5年
級別Ultra Pure Grade
溶解性50 mg/ml Water
別名Isopropyl-β-D-Thiogalactoside;IPTG
英文名稱IPTG(Isopropyl β-D- Thiogalactopyranoside )
CAS367-93-1
分子式C9H18O5S
分子量238.31
儲存條件2-8℃
純度Purity≥99.0%
外觀(性狀)白色粉末
單位

產品簡介

    異丙基-β-D-硫代半乳糖苷,英文名稱IPTG。為安慰性誘導物,X-gal為生色底物,二者共同用于藍白斑篩選。IPTG可誘導載體lac操縱子DNA區段合成β-半乳糖苷酶氨基端片段,該片段可與宿主細胞編碼的缺陷型β-半乳糖苷酶實現基因內互補(α互補)。實現α互補的細菌暴露IPTG,鋪在含有X-gal生色底物的培養基上,可形成藍色菌落。外源DNA插入質粒的多克隆位點后可破壞α互補作用,將產生白色菌落。

特性:純度 :≥99.0% (TLC) 熔點:110-114℃

濕度(%):≤1.0 pH (5%, 水)25℃:5-7

比旋光度 (1%, 水):-34.0--29.0

溶解性:IPTG貯存液,先在8ml蒸餾水中溶解2g,定溶至10ml,用0.22um濾器過濾除菌,貯存于-20℃。

藍白斑篩選中IPTG和X-gal的工作原理和使用方法


細菌藍白斑篩選原理:IPTG為安慰型誘導物,可誘導β-半乳糖苷酶的產生,X-gal是β-半乳糖苷酶的作用底物,在β-半乳糖苷酶的作用下X-gal被切割成半乳糖和深藍色的物質:5-溴-4-靛藍,有色物質可使所在的菌落呈現藍色。但當含有lac啟動子的質粒中插入了外源基因,則不能產生β-半乳糖苷酶,因此不能分解X-gal產生藍色底物,所在的菌落呈現白色(相對藍色),這樣的菌落才有可能是我們想要的菌株。藍白斑篩選減輕了在篩選陽性克隆菌落時的工作量。

使用濃度:IPTG濃度:50mg/ml;X-gal濃度:20mg/ml

直接涂板法:取IPTG溶液10l,X-gal溶液20l滴在培養基上,同時滴加50~100l無菌水或無菌LB,用涂布棒涂抹均勻,放至表面無水后即可使用。

預制板:倒板時,在溫度降至50℃后。每100mlLB中加入250l的IPTG溶液和500?l的X-gal溶液,混勻后制板即可。

注意:

1、X-gal不溶于水,用二甲基甲酰胺(DMF)溶解;

2、X-gal對光敏感,含有X-gal的平板應該避光保存,在1~2周內使用;

3、過夜培養后藍白斑顯示不明顯可將平板放入4℃冰箱中,一段時間后藍白斑顯示會比較明顯,便于挑選。

IPTG誘導原理

首先

E.coli的乳糖操縱子(元)含Z、Y及A三個結構基因,分別編碼半乳糖苷酶、透酶和乙酰基轉移酶,此外還有一個操縱序列O、一個啟動序列P及一個調節?基因I。I基因編碼一種阻遏蛋白,后者與O序列結合,使操縱子(元)受阻遏而處于關閉狀態。在啟動序列P上游還有一個分解(代謝)物基因激活蛋白(CAP)結合位點。由P序列、O序列和CAP結合位點共同構成lac操縱子的調控區,三個酶的編碼基因即由同一調控區調節,實現基因產物的協調表達。

其次

在沒有乳糖存在時,lac操縱子(元)處于阻遏狀態。此時,I序列在PI啟動序列操縱下表達的Lac阻遏蛋白與O序列結合,阻礙RNA聚合酶與P序列結合,抑制轉錄起動。當有乳糖存在時,lac操縱子(元)即可被誘導。在這個操縱子(元)體系中,真正的誘導劑并非乳糖本身。乳糖進入細胞,經b-半乳糖苷酶催化,轉變為半乳糖。后者作為一種誘導劑分子結合阻遏蛋白,使蛋白構象變化,導致阻遏蛋白與O序列解離、發生轉錄。異丙基硫半乳糖苷(IPTG)是一種作用極強的誘導劑,不被細菌代謝而十分穩定,因此被實驗室廣泛應用。

IPTG的優點

1.能誘導酶的合成,但又不被分解的分子,稱為安慰誘導物。由于乳糖雖可誘導酶的合成,但又隨之分解,產生很多復雜的動力學問題,因此人們常用安慰誘導物來進行各種實驗。

2.IPTG不被菌體代謝,為乳糖類似物,一旦進入細胞就會產生持續長久的誘導效果,所以IPTG的誘導效率高,往往只需要很少量(1mmol/L)即可達到理想誘導效果。由于IPTG不被代謝,在胞內專一誘導外源蛋白的表達。不受細胞代謝的影響,誘導效果持續穩定。乳糖有雙效作用,既能做為誘導劑異乳糖的前體物質,又可以做碳源,在誘導過程中,很不穩定,IPTG因其優異的穩定性決定了它適合做實驗研究用。

3.IPTG能在缺乏lacY基因下而有效地被抄送。

4.半乳糖苷鍵中用硫代替了氧,失去了水解活性,但硫代半乳糖苷和同源的氧代化合物與酶位點的親和力相同,IPTG雖不為β–半乳糖苷酶所識別,但它是lac基因簇十分有效的誘導物。



異丙基-β-D-硫代半乳糖苷 IPTG 相關文獻

《Production, Characterization, and Epitope Mapping of Monoclonal Antibodies Against Different Subtypes of Rabbit Hemorrhagic Disease Virus (RHDV)》 作者:Desheng Kong, Jiasen Liu, Qian Jiang, Zuo Yu, Xiao 期刊:《Scientific Reports 6, Article number: 20857 (2016)》 影響因子:4.259 PMID:26878800

《Mutagenesis and redox partners analysis of the P450 fatty acid decarboxylase OleTJE》 作者:Bo Fang, Huifang Xu, Yi Liu, Fengxia Qi, Wei Zhang 期刊:《Scientific Reports 7, Article number: 44258 (2017)》 影響因子:4.259 PMID:28276499



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